雞胚的接種技術

　　雞胚的接種技術

　　雞胚接種技術用途廣泛，除了可以分離培養病毒、支原體及衣原體等病原以確診傳染病外，還可用于病毒的鑒定，效價測定，致病力測定及制造疫苗、抗原等。因此掌握雞胚接種技術對進行傳染病的研究和防制工作非常重要。

　　1 選胚

　　根據需要選用合適日齡的雞胚，大多數病毒適于9～12日齡的雞胚。雞胚應以白色蛋殼者為好，便于照蛋觀察。雞胚應發育正常，健康活潑，不要過大、過小或畸形蛋孵化的胚。雞胚應來自健康無病的雞群，而且不能含有可抑制所接種病毒的母源抗體，最好選用SPF雞胚或非免疫雞胚。

　　2 照蛋定位

　　接種前應在照蛋器下檢查雞胚，挑出死胚和弱胚。對所有健康胚應先用紅鉛筆畫出氣室位置，再于胚胎側畫出接種位點(進針點)，接種點應避開大血管，靠近氣室邊緣處，離胚頭約1cm左右。

　　3 接種

　　照蛋定位完畢后，即可開始接種。先用碘酊將接種位點和氣室消毒，再用70%酒精脫碘，然后根據需要用三棱針或20號針頭在蛋殼上打孑L。尿囊腔接種：最常用的接種方法，雞新城疫、減蛋綜合癥病毒、傳染性支氣管炎病毒、法氏囊病毒等均可采用這種方法。蛋殼消毒后，先在氣室上打一小孑L，再于胚胎一側近氣室處所畫位點打一小孔，用帶5～7號針頭的注射器插入孔內約1.5cm，接種接種材料0.1～0.2mL。進針時針頭與蛋殼應保持30℃角，不應垂直進針，注射完畢，立即用溶化的熱石蠟將注射口和氣室上小孑L密封，然后放回37℃孵化箱孵化72～120h。

　　絨毛尿囊膜接種：主要用于痘病毒、喉氣管炎病毒和馬立克氏病毒等的分離培養。將卵殼消毒后，先在氣室上打一小孔，再于胚胎側靠近氣室處避開大血管用電烙鐵或鋼鋸條將蛋殼打開1個4mm見方的小口，用刀尖小心撬開蛋殼，不能損傷卵殼膜，形成卵窗。用針尖輕輕挑破卵窗中心的卵殼膜，但不能損傷卵殼膜下的絨毛尿囊膜。在針尖挑破處滴1滴滅菌生理鹽水或甘油，然后用吸頭在氣室小孔上吸氣，使胚內造成負壓，這時卵窗處絨毛尿囊膜下陷而形成人工氣室，此時可見生理鹽水或甘油迅速滲入。用注射器滴加2～3滴接種物于卵窗的絨毛尿囊膜上，以透明膠紙封住卵窗。氣室小孔用石臘密封，接種后的雞胚平放在孵化箱中，卵窗向上，不要轉運。

　　卵黃囊接種：適用于馬立克氏病毒、披膜病毒、衣原體及立克次氏體的分離、培養。接種方法：氣室端蛋殼消毒后，在氣室中央打一小孔，用7號針頭注射器垂直刺人約3cm，注射接種物約0.1～0.2mL。石蠟封口，繼續在37℃孵化，每天翻蛋2次。

　　4孵化和觀察

　　接種后繼續在37℃孵化，每天照蛋2次，死胚隨時取出。一般24h內死亡的胚多因創傷或細菌污染所致，放棄去不用。24h以后死亡的胚，取出后放4℃冰箱，并作上記號。接種后的孵化時間長短隨病毒種類不同而不同，一般新城疫病毒、支氣管炎病毒、減蛋綜合征病毒和法氏囊病毒要孵化48～120h，喉氣管炎病毒、馬立克氏病毒要孵化48～96h，痘病毒要孵化4～5天，腦脊髓炎病毒要孵化至小雞出殼。

　　5 收毒

　　接種雞胚孵化到規定時間后，應從孵化器中取出放4℃環境冷凍36h左右，或在一10℃以下速凍4h左右，但不得使雞胚凍結，否則易發生溶血。冷凍完畢按下列步驟收毒。雞胚放于蛋盤或蛋架上，氣室向上，用碘酊、酒精消毒后，以無菌鑷子敲開氣室蛋殼或去掉人工卵窗的透明膠紙，暴露卵膜。注意不要讓卵殼碎屑掉人雞胚內。尿囊液：氣室打開后，用無菌眼科鑷子慢慢撕去卵殼膜，然后夾住絨毛尿囊膜輕輕提起，用巴氏吸管刺破絨毛尿膜直接吸取尿囊液。為防止羊膜堵住吸管口，可用鑷子輕輕壓下羊膜及胎膜，然后再吸。每個雞胚一般可收8mL左右尿囊液。羊水：吸完尿囊液后，可用鑷子夾住羊膜，將巴氏吸管直接插入羊膜腔吸取羊水，然后再用鑷子提起羊膜或壓住胎兒，直至羊水收獲干凈。相當一部分病毒羊水和尿囊液可以混合。有些有能混合，則應將兩者單收、單放。絨毛尿囊膜：如要收獲整個尿囊膜，則可在消毒、打開蛋殼、撕去殼膜后，將整個卵內容物倒出，這時絨毛尿囊膜貼在卵殼內壁上，用鑷子夾住將其撕脫下來即可。胚胎：消毒、打開氣室卵殼后，用鑷子撕破卵殼膜和絨毛尿囊膜，夾起胚胎，用剪刀剪斷卵黃帶，將胎兒放滅菌容器內即可。