溫度是胚胎發育的首要條件，必須嚴格而正確地掌握。優質土雞種蛋的孵化溫度具體如下：
一般情況下，雞胚胎適宜的溫度范圍為37.8-38.2℃。孵化溫度超過42℃，經2-3小時以后即造成胚胎死亡;如溫度低至24℃，經30小時胚胎便全部死亡。
通常立體孵化器孵化雞種蛋的溫度范圍為36.9-37.8℃，但在胚胎發育的不同階段，對溫度的要求有差異。使用立體孵化器孵化雞蛋時，溫度要求是：孵化前期37.8℃;孵化中期37.4℃;孵化后期37.1-37.2℃。
在孵化實踐中，孵化溫度還受孵化機類型、性能、種蛋類型以及外界氣溫等因素的影響，需視具體情況，加以靈活掌握。在使用各種型號機時，應按說明書規定的溫度施溫，用過使用驗證，予以調整，確定適宜的孵化溫度。肉用型的種蛋比兼用、蛋用型的大，蛋殼也較厚，溫度要求稍高些。根據現代孵化室的要求，室溫要控制在10-20℃之間，而目前許多孵化室室溫隨季節氣溫變化而變化，從而影響機內溫度。一般以室溫18-20℃、機溫37.8℃為基礎，如室溫變化范圍在 12-32℃之間，機內溫度相應升降0.19-0.56℃。