經過40～45小時的暫養后，每隔3小時檢查1次雌鱔的成熟及發育情況，直到注射后75小時左右止。檢查的方法是：用手觸摸雌鱔的腹部，并前后移動，當有卵粒游離的感覺時，便可進行人工授精。
人工授精的方法是：挑出成熟的雌鱔，一手用干毛巾握住其前部，另一手由前向后擠壓腹部，將或熟卵擠出并置于玻璃缸或瓷盆中，若遇到有泄殖腔填塞現象時，可在泄殖腔處向里剪開0.5～1厘米的開口后再擠，連續擠壓多次，使其產空為止。擠完卵后即將雄鱔殺死，取出精巢，用剪刀快速充分剪碎后放入擠出的卵中，充分攪拌，并加入任氏液約200毫升，放置5分鐘后，再加清水洗去精巢碎片和血污，完成人工授精后即放入孵化器中進行孵化。